多肽是如何纯化的?
多肽纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH2.0。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/pH2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的多肽,有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗产物,如果多肽不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的多肽。