如何选择适合自己研究的多肽纯度?
多肽的纯度与多肽的净含量
多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长),紫外分光光度计检测不到水和残留的盐份
多肽含量则是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比。通常一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的非盐组份,如水,被吸收的溶剂、配位离子和盐等。
引起多肽的不稳定的原因
脱酰胺反应:在脱酰反应中,Asn/Gln 残基水解形成Asp/Glu。
氧化多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等*易氧化。
水解:多肽中的肽键易水解断裂。由Asp参与形成的肽键比其它肽键更易断裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽键。
形成错误的二硫键:二硫键之间或二硫键与巯基之间发生交换可形成错误的二硫键,导致三级结构改变和活性丧失。
旋:除Gly外,所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的,易在碱催化下发生消旋反应。其中Asp残基*易发生消旋反应。
β-消除:β-消除是指氨基酸残基中β碳原子上基团的消除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr 等残基都可通过β-消除降解。在碱性PH下易发生β-消除,温度和金属离子对其也有影响。
变性、吸附、聚集或沉淀变性一般都与三级结构以及二级结构的破坏有关。在变性状态,多肽往往更易发生化学反应,活性难以恢复。在多肽变性过程中,首先形成中间体。通常中间体的溶解度低,易于聚集,形成聚集体,进而形成肉眼可见的沉淀。
公司对合成的多肽提供分装服务吗?
合生生物生物提供部分或全部订单,免费分装成小份。由于少量分装可以避免多次反复冻融,减少容器的开盖和闭合的次数,减少处理不当或细菌污染的机会,让您的多肽更加稳定。
多肽应该如何保存?
多肽一般是以冻干粉的形式保存,其在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥后并保存于-20℃干燥器中,大多数肽在此温度下可以存放几年不变。如果一次使用的肽量不多,*好分装成几个小包装,取用更为方便。
为减少湿度的影响,在将冻干肽暴露于空气之前,应先将其在干燥的条件下恢复至室温。当无法冷冻干燥时,*好的方法是以较小的样量存放,并尽快使用。
对于含Met,Cys或Trp的多肽,脱氧缓冲剂对其保护必不可少,因为这种多肽易被空气氧化,比较好的解决方法是可以在封瓶前,慢慢通入氮气或氩气流从而降低氧化作用,没有条件的建议-80度干燥冻存。
含Gln或Asn的多肽也容易降解,所以相对于其他不含此类氨基酸的多肽,其保存期较短。
如何对合成的多肽进行质检?
合生生物生物免费提供HPLC和MS检测结果。公司所有多肽均采用反相色谱法纯化。以质谱法测定肽的分子量来确定产品是否正确,MS检测结果还可显示大部份的主要杂质。如果必要,还可提供肽净含量检测,如氨基酸分析或元素分析。这些方法可以证实多肽的氨基酸组成,他们均可作为多肽确认的补充方法。所有交付的肽均达到了您要求的纯度。没有达到纯度要求的那些多肽均被丢弃。当然如果您有需要,也可以发送给您。
荧光标记时,肽和修饰标记的染料之间需要加一个间隔吗?
多数染料属于大分子量芳香族氨基酸,在多肽中引入这一类大型分子,为了避免多肽与标签之间发生相互作用,维持蛋白的构象及其生物学活性,我们推荐引入一个可弯曲的间隔区,比如Ahx, Ahx是一个含有6碳分子的环状结构,可以维持荧光标签的稳定性。否则,FITC很容易结合多肽序列中的半胱氨酸残基或者赖氨酸残基。
通常情况下,生物素、FITC一类的染料既可以标记在蛋白的氨基端也可以标记在蛋白的羧基端。然而,为了在*短时间内,*便捷又高效地合成多肽,***推荐客户选择标记在氨基端。因为一个多肽的合成往往是从羧基端开始的,这样一来,氨基端的修饰便成为*后一个环节,不需要再进行特别的结合作用。反之,羧基端修饰需要额外的环节,因此过程更加复杂。
为什么要进行N端乙酰化,C端酰胺化修饰?
化学合成的肽往往携带游离的氨基和游离的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列,为了与母本蛋白更为接近,肽末端往往需要封闭,即N端乙酰化和C端酰胺化,这些修饰会减少多肽的总电荷,降低多肽的溶解度,也可以使肽模拟它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态。
如果需要对N端进行乙酰化修饰或对C端进行酰胺化修饰,请在下单时明确。合成一旦结束,则不能再进行修改。
能够合成的多肽的*大长度是多少?
我们成功合成了长度为120个氨基酸的多肽。 50个氨基酸长度的多肽属于常规合成。
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